谷胱甘肽的檢測方法
2020-11-18
谷胱甘肽檢測方法較多,比較常用的有碘量法、DTNB(Ellman試劑)法、亞硝基鐵氰化 鈉法、熒光法、四氧嘧啶法和高效液相色譜法( HPLC),上述方法各有優(yōu)點(diǎn),在檢測GSH含量時(shí)可根據(jù)實(shí)際情況,選擇適合、靈敏、精確的檢測方法。
DTNB比色法
原理:DTNB與谷胱甘肽的巰基反應(yīng)生成黃色的5 - 硫代 - 2 -硝 基苯甲酸,在412 nm波長處有最大吸收峰,而DTNB在400nm以上幾乎沒有吸收峰,向含有谷胱甘肽的試樣中加入少量的DTNB,將反應(yīng)液在412 nm處測定吸收值,根據(jù)吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量。
方法步驟:
1、DTNB貯存液配制:將0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸緩沖液(pH7.0)中形成DTNB貯存液。
2、DTNB分析液配制:將DTNB貯存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl緩沖液稀釋100倍,配成DTNB分析液,避光放置,現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、操作步驟:取谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)品溶液或待測樣品溶液(0.1 ~ 3.0 mol/L)0.5 mL,加入到1.5 mL濃度為0.15 mol/L的NaOH溶液中,再加入3%的甲醛溶液05mL,在pH8.0、25℃下反應(yīng)2 min,反應(yīng)結(jié)束后。取反應(yīng)液0.5 mL加入DTNB分析液,在25℃下反應(yīng)5 min,于波長412 nm下測定吸收值,根據(jù)兩者的吸光度,計(jì)算差值,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出谷胱甘肽的含量。
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