三磷酸腺苷二鈉含量測定
2020-11-15
含量測定: 總核著酸取三磷酸腺苷二鈉適量,精密稱定,加0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉35.8g,加水至1000ml,無水磷酸二氫鉀13.6g,加水至1000ml。二液互調(diào)pH值至70)使溶解并制成每1ml中含20μg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在259nm的波長處測定吸光度,按C10H14N5Na2O13P3的吸收系數(shù)(E 1%/1cm)為279計(jì)算。
三磷酸腺苷二鈉的重量比 照高效液相色譜法測定,色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉35.8g、磷酸二氯鉀13.6g,加水900ml溶解。用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0.加入四丁基溴化銨1.6g,加水至100Oml,搖勻)-甲醇(95:5)為流動(dòng)相;柱溫為35℃,檢測波長為259nm,理論板數(shù)按三磷酸腺苷二鈉峰計(jì)算不低于1500.出峰次序依次為一磷酸腺苷納、二磷酸腺苷二鈉與三磷酸腺苷二鈉,各色譜峰的分離度應(yīng)符合要求。
測定法取本品適量.精密稱定,用流動(dòng)相制成每1ml中含4mg的溶液.取10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按下式計(jì)算三磷酸腺苷二鈉(T3)在總核著酸中的重量比,三磷酸腺苷二鈉重量比=T3/0.671T1+0.855T2+T3+Tx式中 T1為一磷酸腺苷鈉的峰面積,T2為二磷酸腺苷二鈉的峰面積,T3為三磷酸腺苷二鈉的峰面積,Tx為其他物質(zhì)的峰面積,0.671為一磷酸腺苷鈉與三磷酸腺苷二鋼分子量的比值,0.855為二磷酸腺苷二鈉與三磷酸腺苷二鈉分子量的比值,三磷酸腺苷二鈉含量按下式計(jì)算三磷酸腺苷二鈉含量(%)= 總核苷酸×三磷酸腺苷二鈉的重量比。
貯藏: 密封,涼暗干燥處保存。
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