谷胱甘肽測試方法
2021-05-20
谷胱甘肽的檢測方法很多,常用的方法有碘量法,DTNB(Ellman試劑)法,硝基鐵氰 化鈉法,熒光法,四氧嘧啶法和液相色譜法(HPLC)。 以上方法各有優(yōu)點(diǎn),檢測谷胱甘肽含量時(shí),可以根據(jù)實(shí)際情況選擇合適,靈敏,準(zhǔn)確的檢測方法。
DTNB比色法
原理:DTNB與谷胱甘肽的巰基反應(yīng)生成黃色的5-硫-2-硝基 苯甲酸,在412 nm波長處有一個(gè)較大吸收峰,而DTNB在400 nm以上幾乎沒有吸收峰,向含有谷胱甘肽的樣品中加入少量DTNB,測量反應(yīng)溶液在412 nm處的吸光度,并根據(jù)吸光度獲得谷胱甘肽含量。
方法步驟:
1. DTNB存儲(chǔ)溶液的制備:將0.01 mol / L DTNB溶解在0.05 mol / L磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)中以形成DTNB存儲(chǔ)溶液。
2. DTNB分析溶液的制備:用0.5 mol / L,pH8.0 Tris-HCl緩沖溶液稀釋DTNB儲(chǔ)備溶液100倍,制備DTNB分析溶液,在黑暗中保存,準(zhǔn)備用于當(dāng)前使用。
3.操作步驟:取0.5 mL谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)溶液或測試樣品溶液(0.1?3.0 mol / L),將其加入1.5 mL濃度為0.15 mol / L的NaOH溶液中,然后加入3%甲醛, 溶液為05mL,并在pH 8.0和25℃下反應(yīng)2分鐘,反應(yīng)后,將0.5mL反應(yīng)溶液加入到DTNB分析溶液中,在25℃下反應(yīng)5分鐘,并在412nm的波長處測量吸光度,根據(jù)兩者的吸光度,計(jì)算出差異并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線以計(jì)算谷胱甘肽含量。
碘量分析
原理:利用谷胱甘肽的還原性與碘酸鉀反應(yīng),當(dāng)谷胱甘肽完全反應(yīng)時(shí),碘酸鉀會(huì)將碘化鉀氧化為碘,碘會(huì)使淀粉指示劑變藍(lán),這是滴定的終點(diǎn)。
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