關(guān)于胞磷膽堿鈉的制備方法有很多報(bào)導(dǎo)，但大致可以歸納為三種方式。一個(gè)是有機(jī)化學(xué)合成，該方法存在產(chǎn)品與縮合劑分離困難、不適用于醫(yī)用、反應(yīng)轉(zhuǎn)化率低、副產(chǎn)物多、成本高、環(huán)境污染嚴(yán)重等問題。一種是微生物發(fā)酵，存在產(chǎn)品濃度低、產(chǎn)量不穩(wěn)定等一些問題，另一種是酶法合成，如啤酒酵母泥等微生物生物合成。利用游離啤酒酵母泥細(xì)胞進(jìn)行酶促合成具有工藝簡(jiǎn)單、轉(zhuǎn)化率高、成本低的優(yōu)點(diǎn)。酶法合成胞磷膽堿鈉的過程可分為酶法合成和提取純化兩部分。本文通過正交設(shè)計(jì)研究了酶促合成過程中反應(yīng)液組成的理想條件，即優(yōu)化了反應(yīng)液中胞苷、磷酸膽堿、葡萄糖、速凍啤酒酵母膏和硫酸鎂的添加量，并找到了合適的反應(yīng)底物配比。

　　實(shí)驗(yàn)方法

　　啤酒酵母泥酶促合成胞磷膽堿鈉的原理是由微生物細(xì)胞提供的酶催化胞苷和磷酸膽堿合成胞苷二磷酸膽堿。利用國(guó)內(nèi)啤酒生產(chǎn)中的廢啤酒酵母泥。

　　將適量胞苷、磷酸膽堿和葡萄糖置于錐形瓶中，加入純化水，攪拌溶解，然后加入速凍啤酒酵母泥，攪拌均勻，升溫至29℃。加入一定量的硫酸鎂，攪拌均勻，開始計(jì)時(shí)。維持反應(yīng)溫度在30±1℃左右，反應(yīng)2小時(shí)后取樣，測(cè)定轉(zhuǎn)化率，加入葡萄糖補(bǔ)充代謝過程中消耗的能量物質(zhì)。加入葡萄糖后，攪拌均勻。反應(yīng)后，每1.5小時(shí)加入一次葡萄糖。反應(yīng)8小時(shí)后，取樣并測(cè)量轉(zhuǎn)化率。反應(yīng)過后。加熱至70±2℃10分鐘，然后迅速冷卻至室溫。反應(yīng)液經(jīng)板框壓濾得到濾液，濾渣干燥后可作為飼料使用。以胞苷的轉(zhuǎn)化率計(jì)算胞磷膽堿鈉酶促合成的產(chǎn)率，在30±1℃下反應(yīng)時(shí)間約為8h。瓊脂糖電泳和紫外分光光度法測(cè)定轉(zhuǎn)化率三次。